目的:探討幾種綠茶中槲皮素的含量。方法:建立高效液相色譜(HPLC)法分別測定市售龍井、碧螺春、毛峰、毛尖茶葉中槲皮素的含量。結(jié)果:高效液相色譜測定系統(tǒng)可以分離得到龍井、碧螺春、毛峰、毛尖茶中的槲皮素,其中龍井的槲皮素含量最高。實驗的精密度與重現(xiàn)性好。結(jié)論:通過對幾種綠茶中槲皮素含量的測定和比較，得出較優(yōu)者。為人體膳食調(diào)節(jié)提供理論依據(jù)，并為茶葉深加工提供信息。
綠茶；槲皮素；含量測定；高效液相色譜法
茶葉中的多酚物質(zhì)[1]是由黃烷醇類、花色素類、花黃素類、縮酸、縮酚酸類和槲皮素組成,其中槲皮素可清除自由基[2],有抗癌,抑制促癌劑的作用,及抗血小板凝集和5-羥色胺(5-HT)的釋放作用;可抵抗病毒,防感冒,并有較好的祛痰、止咳平喘作用,用于治療慢性支氣管炎;還可起到降低血壓、增強毛細血管抵抗力、降血脂、增加冠狀動脈血流量等作用，對出血性疾病、循環(huán)障礙、動脈粥樣硬化等具有較高療效,對冠心病及高血壓患者有輔助治療作用。本文應(yīng)用高效液相色譜法測定龍井、碧螺春、毛峰、毛尖的槲皮素含量,實驗流程簡單,效果良好,可作為綠茶質(zhì)控的一種參考。通過對幾種綠茶中槲皮素含量的比較,得出較優(yōu)者。為人體膳食調(diào)節(jié)提供理論依據(jù),并為茶葉產(chǎn)品在生化方面的深加工提供信息?，F(xiàn)報道如下：
1材料與方法
1.1供試材料、儀器與試劑
綠茶樣品為市售的西湖龍井，洞庭碧螺春，黃山毛峰，信陽毛尖。高效液相色譜儀:島津LC-10ATvp液相色譜儀,包括LC-10AT色譜泵、SPD-10Avp紫外檢測器、混合器;色譜柱：PhenomenexGeminiC18。超聲清洗器。槲皮素對照品購自sigma公司。
1.2實驗方法
1.2.1色譜條件色譜柱:PhenomenexGeminiC18(5μm,4.6mm×250mm)。流動相，A相：乙腈-甲醇(9∶1),B相:0.15%醋酸銨溶液梯度洗脫。程序為：0～10min,從10%A線性梯度至15%A;10～50min，從15%A線性梯度至50%A;50～55min，線性梯度從50%A至80%A。每次運行結(jié)束后以初始流動相平衡色譜柱20min，以保證出峰情況穩(wěn)定。檢測波長為280nm,流速為1.0ml/min，進樣量：20μl，柱溫為25℃。甲醇、乙腈為色譜純。實驗用水為雙蒸餾水。
1.2.2對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素對照品10mg置100ml容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,即得濃度為100μg/ml的槲皮素對照品溶液。
1.2.3供試品溶液的制備取龍井、碧螺春、毛峰、毛尖各200g茶樣,100℃水浴浸提,抽濾,再用氯仿、乙酸乙酯分別萃取酯層和水層,濃縮,減壓干燥,得到粗粉,研細,待用。
精密稱取細粉約1.0g置具塞錐形瓶中,精密加入50%(體積分?jǐn)?shù))的甲醇20ml,密塞,稱定重量,超聲處理20min,放冷,再稱定重量,用50%(體積分?jǐn)?shù))的甲醇補足減失的重量,搖勻,過濾,精取續(xù)濾液5ml,置10ml容量瓶中,并用甲醇定容至刻度,搖勻,經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。
2結(jié)果與分析
2.1高效液相法分離綠茶槲皮素
峰1為槲皮素,2為表沒食子兒茶素(EGC)。2.2系統(tǒng)適用性試驗
分別取對照品溶液、供試品溶液各20μl進樣測定,理論塔板數(shù)大于50000，供試品溶液中槲皮素峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于1。
2.3線性關(guān)系考察
精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素對照品20.0mg置100ml容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,分別精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6、7ml置于10ml容量瓶中,加甲醇稀釋于刻度,搖勻,制成標(biāo)準(zhǔn)系列。分別精密吸取各溶液20μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以槲皮素峰面積(Y)為縱坐標(biāo),以槲皮素進樣量(X)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計算回歸方程為:Y=1.714216224X,r=0.9471,結(jié)果表明槲皮素在0.4～2.8μg范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。
2.4穩(wěn)定性試驗
精密吸取龍井茶供試品溶液，依上述色譜條件,分別在0、12、24、48、72、96h進樣20μl，測得槲皮素的峰面積為37316，37321，37325，37312，37321，37319，RSD值為0.05%，表明供試品在96h內(nèi)穩(wěn)定。
2.5精密度與重復(fù)性試驗
取槲皮素對照品溶液,在上述色譜條件下進行分析,連續(xù)進樣6次,測定其峰面積,槲皮素峰面積為32450,32391,32355,32570,32390,32246,結(jié)果計算RSD值為0.738%(n=6),結(jié)果表明精密度高。取龍井茶細粉5份,每份1.0g,按“1.2.3項”方法制備樣品溶液,后按上述色譜條件進行分析,槲皮素峰面積為37317,37113,37642,37504,37214,RSD值為1.15%,結(jié)果表明重復(fù)性良好。
2.6加樣回收率試驗
精密稱取已知含量的龍井茶細粉5份,每份1.0g,分別加入槲皮素對照品適量,按“1.2.3項”方法制備樣液,后按上述色譜條件下,注入色譜儀,測得槲皮素的含量,結(jié)果平均回收率為99.83%,RSD值為0.96%.
2.7含量測定
每種綠茶樣品,每種精取細粉1.0g,按“1.2.3項”下方法制備供試液,在上述色譜條件下,分別精密吸取按“1.2.2項”和“1.2.3項”方法制備好的對照品溶液及供試品溶液各20μl,進樣,測定各自峰面積,按外標(biāo)峰面積法計算龍井、碧螺春、毛峰、毛尖中槲皮素的含量。結(jié)果見表1。
3討論
綠茶是我國特有的茶類,歷史悠久,近年來有研究綠茶中槲皮素的綜合提取工藝技術(shù),主要考察了綠茶多酚的浸提條件,茶多酚浸提液的超濾條件,大孔吸附-樹脂純化茶多酚的層析技術(shù),高效液相色譜分析槲皮素含量。目前有關(guān)綠茶加工技術(shù)及理論的研究主要集中在工藝優(yōu)化、品種與工藝的關(guān)系、加工中在制品香氣、滋味成分的組成與變化等方面[3],而對于綠茶品質(zhì)化學(xué)的深入研究,還有待進一步加強。
高效液相色譜法已應(yīng)用到綠茶中槲皮素的分離,溶劑體系的選擇是高效液相色譜法分離的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本實驗考察了不同比例的流動相,最后確定流動相乙腈和甲醇的比例,從而使樣品中槲皮素達到良好的分離。檢測波長選取280nm,因為槲皮素是從茶多酚中提取的,茶多酚中的兒茶素類物質(zhì)與槲皮素在280nm都有較高吸收[4],而且通過實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)測得結(jié)果理想,所以選取該波長。
4種茶分離得到的槲皮素,以龍井的槲皮素含量最高;4種茶的EGC都較高,說明綠茶中含大量的EGC,其中碧螺春的EGC含量最高。
[參考文獻]
[1]李萌,王華燕,胡文祥,等.HPLC法快速測定茶多酚中兒茶素類及咖啡因含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊,2007,9(6):506-507.
[2]郭素枝,張育松,陳洪德.淺述茶葉中幾種成分對清除人體自由基的作用[J].農(nóng)業(yè)考古,1998,18(4):276-277.
[3]王歡,張澤民.影響茶葉香氣的幾種因素[J].福建茶葉,1997,19(3):40-42.
[4]姜廷福,師彥平.天然產(chǎn)物黃酮類化合物的高效液相色譜分析[J].分析測試技術(shù)與儀器,2002,8(4):199-207.
本文作者(董宇靜張玉英),請您在閱讀本文時尊重作者版權(quán)。
