RAPD等在茶樹(shù)基因研究中的應(yīng)用

　　研究RAPD主要是研究分析它們的核、線粒體、葉綠體中的染色體，與培養(yǎng)條件無(wú)關(guān)。對(duì)3個(gè)成熟的無(wú)性系良種茶樹(shù)，即雙倍體品種UPASI26、UPASI27和三倍體品種UPASI3（前兩個(gè)品種代表中國(guó)小葉種，后一品種代表印度阿薩姆種）的節(jié)外植體，應(yīng)用能促進(jìn)腋芽分化的組織培養(yǎng)技術(shù)獲得微繁植株，利用復(fù)合分子DNA標(biāo)記技術(shù)，通過(guò)分析它們的核、線粒體、葉綠體中的染色體，對(duì)其基因完整性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
　　對(duì)微繁植株及相應(yīng)母株U（UPASI）26、U3和U27，分別使用RAPD、ISSR和RFLP印跡標(biāo)記術(shù)獲得了總數(shù)為465、446、462個(gè)遺傳軌跡。RFLP印跡標(biāo)記術(shù)是在84對(duì)酶和探針組合中，采用了6個(gè)限制性內(nèi)切核酸酶消化和14個(gè)線粒體和葉綠體基因探針；在PCR印跡標(biāo)記法中，50個(gè)RAPD和SSR引物被用來(lái)擴(kuò)增。在對(duì)U3和U27微繁植株分析的446個(gè)和462個(gè)遺傳軌跡中，顯示出完整的遺傳穩(wěn)定性，而U26微繁植株和465個(gè)遺傳軌跡中，卻有36個(gè)（占7.7%）是多態(tài)的。這些多態(tài)軌跡并不限于特定的核或細(xì)胞器的染色體中，但核染色體中的多態(tài)性水平相對(duì)較低，為7.43%；線粒體染色體中為16.3%。
　　ISSR法檢出的多態(tài)軌跡（12.8%）比RAPD法（4.28%）高。在3個(gè)品種微繁植株的葉綠體染色體中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)多態(tài)性。這是首次發(fā)現(xiàn)由分生組織發(fā)育的茶樹(shù)微繁植株在DNA序列水平存在微妙的基因差異，這也表明通過(guò)分生組織培養(yǎng)的植株并不總是純種的?？梢?jiàn)，無(wú)性茶樹(shù)的染色體變異是基因型的，與培養(yǎng)條件無(wú)關(guān)。