一、什么是動脈粥樣硬化
動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一種炎癥性、多階段的退行性的復(fù)合性病變，病理變化十分復(fù)雜，至今沒有得到完全的闡明。20世紀(jì)90年代美國科學(xué)家Ross提出動脈粥樣硬化發(fā)病的損傷學(xué)說，即動脈粥樣硬化是在損傷因子的作用下導(dǎo)致的一個慢性炎癥的過程，指套包括四期的病理變化：動脈血管內(nèi)膜功能紊亂期，血管內(nèi)膜脂質(zhì)條紋期，典型斑塊期和斑塊破裂期。動脈周天硬化的病程是從受累動脈的內(nèi)膜受損開始，先后出現(xiàn)局部脂質(zhì)條紋、平滑肌細(xì)胞的遷移增生、纖維分泌，直至在動脈內(nèi)膜形成以脂質(zhì)為核心，外有纖維帽包裹的典型斑塊。由于動脈內(nèi)膜聚集的脂質(zhì)斑塊外觀呈黃色粥樣，故稱為動脈粥樣硬化。形成的斑塊有穩(wěn)定性斑塊和易損性（不穩(wěn)定）斑塊兩種類型。
二、引起動脈粥樣硬化的主要原因
動脈粥樣硬化的病因尚不完全清楚，但高脂血癥或高脂蛋白血癥與動脈粥樣硬化發(fā)生密切相關(guān)。目前認(rèn)為除了遺傳、年齡、肥胖、吸煙、機(jī)體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高和缺乏體力活動等危險因素外，人類所吃的食物在動脈粥樣硬化的發(fā)病中起著極為重要的作用，尤其是高能量和高脂肪的食物。目前大多研究認(rèn)為甘油三酯是動脈粥樣硬化的獨(dú)立危險因素。
三、動脈粥樣硬化對健康的主要危害
冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是動脈粥樣硬化導(dǎo)致器官病變的最常見疾病，也是嚴(yán)重危害人類健康的常見疾病。過去認(rèn)為動脈粥樣硬化性心臟病嚴(yán)重時可導(dǎo)致心肌梗死和心力衰竭，但是近年來的研究認(rèn)為易損性斑塊的破裂還是導(dǎo)致脈管綜合癥以及死亡的主要原因。動脈沉積斑表面有一層稱作為“蓋子”的細(xì)胞（纖維帽），將沉積斑的核與流經(jīng)沉積斑的血分隔開。在易損性斑塊中（比較危險的沉積斑），表面的這層“蓋子”細(xì)胞既薄且脆。在血流的沖擊下，蓋層很容易破碎。粥樣沉積斑一旦破碎，破碎的碎片會混入血液。血流開始在沉積斑破碎的部位凝集，這種凝集發(fā)生咋速度非?？?，能迅速的堵塞整個動脈血管。當(dāng)動脈血管在短時間被堵塞時，血流沒有時間形成其他路徑。這種情況發(fā)生后，破裂處下游的血流量急劇減少，心肌不能得到足夠的氧氣，這時心肌細(xì)胞開始死亡，心臟的搏動機(jī)能開始衰退，患者會感到胸部劇痛，或先是肩膀部有灼痛感，然后向上傳導(dǎo)至脖子和下巴處。簡單說，患者開始進(jìn)入死亡狀態(tài)。
現(xiàn)在知道了動脈粥樣硬化是如何到時心臟病的，動脈斑的破裂是最致命的。那么人類怎么才能預(yù)測心臟病發(fā)作的時間呢？不幸的是，按照人類現(xiàn)有的技術(shù)條件，還做不到預(yù)測心臟病的發(fā)作時間。不知道什么時候沉積斑會破裂，哪些沉積斑會破裂，或情況可能有多嚴(yán)重。但是事實(shí)證明了心臟病發(fā)作的相對危險度。因而預(yù)防斑塊的形成、促進(jìn)斑塊的消退和提高斑塊的穩(wěn)定性是動脈粥樣硬化防治的主要策略，也是預(yù)防冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的主要途徑。
四、普洱茶坑動脈粥樣硬化作用的研究
人類高脂血癥與動脈粥樣硬化發(fā)病密切相關(guān)。降低血漿的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），升高血漿高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的措施顯示能夠降低動脈冠心病的發(fā)生和死亡率。目前臨床治療動脈粥樣硬化主要措施就是改善血脂。膳食和營養(yǎng)因素與血脂的變化密切相關(guān)，控制飲食和改善營養(yǎng)狀況已成為防治動脈粥樣硬化和冠心病的重要途徑。
本書第一章介紹過，高脂血癥可以分成原發(fā)性與繼發(fā)性兩類，即原發(fā)生性高脂血癥和繼發(fā)性高脂血癥。遺傳因素引起高脂血癥屬原發(fā)性高脂血癥，可能發(fā)生在細(xì)胞水平上，主要表現(xiàn)為細(xì)胞表面脂蛋白受體缺陷以及細(xì)胞內(nèi)某些酶的缺陷（如脂蛋白脂酶的缺陷或缺乏），也可能發(fā)生在脂蛋白代謝異常疾病，如家族性異常脂蛋白血癥發(fā)病率為1/10000，是由于ApoE的特殊突變導(dǎo)致CM及VLDL的代謝殘余與脂蛋白受體正常連接受阻。本實(shí)驗(yàn)則是一普洱茶作為供試材料，采用ApoE基因敲除小鼠為試驗(yàn)動物模型(apolipoproteinEgeneKnockout,ApoE-/-),為目前國際上公認(rèn)的試驗(yàn)?zāi)Ｐ蛣游?。這種基因敲出小鼠血漿膽固醇濃度為正常小鼠的5倍。即使在普通飼料喂養(yǎng)條件下，也可以形成動脈粥樣硬化幾乎所有階段的發(fā)病，并與人類的病變非常相似。期望通過這個試驗(yàn)，探討普洱茶坑ApoE基因敲除小鼠高脂血癥和動脈粥樣硬化的作用，以期為普洱茶防治遺傳因素相關(guān)的人類高脂血癥和動脈粥樣硬化提供試驗(yàn)依據(jù)。
方法：
ApoE（-/-）小鼠8周齡雄性40只（實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)可許號：SCXK(京)2006-0008），購自北京大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。8周齡雄性C57/6J小鼠10只（實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(渝)2007-0008），購自第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院。在SPF級動物實(shí)驗(yàn)室用全價顆粒飼料飼養(yǎng)（飼料生產(chǎn)許可證SCXK(滇)2005-2009）。適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為ApoE（-/-）對照組以及ApoE（-/-）普洱生、熟茶組和市售品藥物對照組，并設(shè)ApoE（+/+）對照組。對照組給予蒸餾水，干預(yù)組給予普爾生茶、熟茶30mg/kg.bw,市售降脂中藥10mg/kg.bw，每天經(jīng)口灌胃，連續(xù)3個月。
試驗(yàn)期間每天觀察小動物外觀特征、行為活動、皮毛、呼吸、五官、外生殖器官及糞便性狀等。每周測體重一次，根據(jù)體重變化調(diào)整給予量。3個月后，所有動物禁食不禁水過夜，次日犧牲動物，收集全血2~3ml與5ml離心管中，以3000r/min離心15min，制備清血，零下20攝氏度凍存。檢測小鼠血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。計算動脈硬化指數(shù)（AI），檢測hs-CRP；解剖取主動脈等進(jìn)行病理組織檢查。
試驗(yàn)研究結(jié)果
1.普洱茶可明顯降低有遺傳因素引起的動脈粥樣硬化試驗(yàn)動物的體重
ApoE（-/-）對照組和各干預(yù)組體重、肝臟重量均大于ApoE（+/+）對照組，說明本研究的試驗(yàn)小鼠已經(jīng)開始出現(xiàn)病變。與ApoE（-/-）對照組相比，灌胃普洱茶8周后ApoE（-/-）普洱生茶組體重顯著減輕，12周后普洱生茶組、普洱熟茶組和市售品藥物組體重、肝臟重量均有減輕，但肝臟系數(shù)未見差異；
2.普洱茶可有調(diào)節(jié)由遺傳因素引起的動脈粥樣硬化試驗(yàn)動物的血脂水平
ApoE（-/-）對照組和各干預(yù)組總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）以及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）均高與ApoE（+/+）對照組。與ApoE(-/-)對照組相比，普洱生茶組、普洱熟茶組和市售品藥物組總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）均顯著降低，說明普洱生茶和普洱熟茶均可有效降低由遺傳性因素引起的動脈粥樣硬化試驗(yàn)動物的血脂水平。
3.普洱茶可顯著降低由遺傳因素引起的動脈粥樣硬化試驗(yàn)小鼠的動脈硬化指數(shù)
ApoE（-/-）對照組和各干預(yù)組動脈硬化指數(shù)大于ApoE（+/+）對照組。與ApoE（-/-）對照組相比，普洱生茶組、普洱熟茶組和市售品藥物組動脈硬化指數(shù)均顯著降低，提示普洱茶可顯著降低由遺傳性因素引起的動脈粥樣硬化試驗(yàn)小鼠的動脈硬化指數(shù)，能夠有效阻止動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。
4.普洱茶可顯著降低有遺傳因素引起的動脈粥樣硬化試驗(yàn)小鼠心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險
C-反應(yīng)蛋白是由人體中的肝細(xì)胞所產(chǎn)生的特殊蛋白，為發(fā)炎反應(yīng)的指標(biāo)。近年的研究發(fā)現(xiàn)，在動脈粥樣硬化的形成過程中，發(fā)炎反應(yīng)扮演這重要的角色。發(fā)炎指標(biāo)也是評估心血管疾病風(fēng)險的重要因子，而hs-CRP是目前應(yīng)用最普遍的，它可以作為心血管疾病風(fēng)險的預(yù)測指標(biāo)。高濃度的hs-CRP會影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的特征，造成組織的損傷。從動脈粥樣硬化一開始的脂肪紋到發(fā)炎細(xì)胞的浸泡及內(nèi)皮細(xì)胞功能的破環(huán)，甚至到最后硬化斑的破裂等，hs-CRP都參與其中。
本研究發(fā)現(xiàn)ApoE（-/-）對照組和各干預(yù)組血清hs-CRP高于ApoE（+/+）對照組，說明試驗(yàn)小鼠已經(jīng)出現(xiàn)了動脈粥樣硬化的病變。采用普洱生茶和熟茶灌胃3個月后，與ApoE（-/-）對照組相比，普洱生茶組、普洱熟茶組和市售品組試驗(yàn)小鼠血清hs-CRP均顯著降低，說明普洱茶可顯著降低試驗(yàn)小鼠血清中的hs-CRP含量。
5.普洱茶可明顯減少由遺傳因素引起的動脈粥樣硬化試驗(yàn)小鼠粥樣斑塊的形成
本研究對試驗(yàn)小鼠的主動脈進(jìn)行了病理檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ApoE（+/+）對照組主動脈壁厚薄均勻，內(nèi)膜、中膜和外膜未見異常ApoE（-/-）對照組可見大量泡沫細(xì)胞及膽固醇結(jié)晶形成的粥樣斑塊期病變，內(nèi)膜完整性破環(huán)，大量泡沫細(xì)胞形成和堆積，突向管腔；普洱生茶組和普洱熟茶組動脈粥樣硬化程度與ApoE（-/-）對照組相比明顯減輕，內(nèi)膜輕度隆起和增厚，泡沫細(xì)胞減少為了得到更準(zhǔn)確的試驗(yàn)結(jié)果，本研究還對試驗(yàn)小鼠的主動脈病理切進(jìn)行電鏡觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ApoE（+/+）對照組主動脈內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)吞飲小泡正常；對照主動脈內(nèi)皮細(xì)胞水腫變性，體積增大，胞質(zhì)疏松，內(nèi)皮細(xì)胞壞死脫落，完整性破壞，細(xì)胞間隙增寬，胞漿內(nèi)可見大量吞飲小泡；普洱生茶組與普洱熟茶組內(nèi)皮細(xì)胞排列較為規(guī)則，病變程度較輕。說明普洱茶在預(yù)防動物動脈粥樣硬化方面起到一定作用。
五、普洱茶防治動脈粥樣硬化的優(yōu)勢分析
以往的大小鼠等動脈粥樣硬化動物模型多采用高脂飼料長期飼養(yǎng)，由于大小鼠等動物先天具有抵抗膽固醇的特性，在制作模型時膽固醇負(fù)荷往往是數(shù)十倍與正常膳食得到急性過程，這與人類實(shí)際的慢性高脂血癥情況相差甚遠(yuǎn)。ApoE基因敲除小鼠亦稱ApoE基因缺陷小鼠，其血漿含膽固醇豐富的殘粒清除受阻，喂飼普通飼料即可出現(xiàn)高膽固醇血癥，并自發(fā)地形成纖維斑塊和復(fù)合斑塊，且斑塊的分布與人類動脈粥樣硬化斑塊的分布極為相似。ApoE（-/-）小鼠在5~6周齡時主要是單核細(xì)胞趨附于損傷的內(nèi)皮細(xì)胞處，8~10周齡脂質(zhì)條紋逐漸形成，15~20周齡后逐漸出現(xiàn)纖維斑塊，粥樣斑塊大約在25~30周齡左右逐漸形成，35周齡以后，粥樣斑塊有出血、斑塊破潰、血栓形成等各種并發(fā)癥，甚至有的小鼠因急性心腦血管事件自發(fā)死亡。病變部位一主動脈根最為明顯，其次為胸主動脈。ApoE（-/-）小鼠體內(nèi)存在著嚴(yán)重的脂質(zhì)代謝紊亂，人動脈粥樣硬化各階段的病理表現(xiàn)均可見于模型中。因此，目前它已成為研究動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的細(xì)胞與分子機(jī)制和研究治療手段的極佳實(shí)驗(yàn)動物模型。
本試驗(yàn)采用ApoE基因敲除小鼠，檢測了普洱茶干預(yù)前后血脂和hs-CRP水平、AI值變化、主動脈病理變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與ApoE（-/-）對照組相比，普洱生茶和普洱熟茶組TC、TG、LDL-C和hs-CRP水平以及AI值明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。提示普洱茶有降低血脂中TC、TG和LDL-C的作用，降低體內(nèi)的炎癥介質(zhì)水平，減輕主動脈粥樣硬化損傷程度及AI值，得出普洱茶具有抗ApoE基因敲除小鼠（-/-）動脈粥樣硬化作用的結(jié)論。完成了遺傳因素到飲食因素普洱茶原發(fā)性高脂血癥的作用研究。一般來說，高脂飲食性高脂血癥可以通過控制高脂、高膽固醇等的攝入，加強(qiáng)運(yùn)動來調(diào)節(jié)，但遺傳因素引起的往往較難控制。為什么普洱茶既對高脂飲食大鼠模型，又對ApoE基因敲除小鼠模型有作用呢？還需要進(jìn)一步的探討。
本文主編：邵宛芳教授《首本科學(xué)詮釋普洱茶保健功效科普讀物》
