福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院/茶學(xué)福建省普通高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室林秋香等，通過(guò)測(cè)定白毫銀針茶湯干預(yù)前后細(xì)胞的甘油三脂(TG)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力水平、丙二醛(MDA)含量變化，油紅染色，分析細(xì)胞內(nèi) SREBP-1c、FAS 和 CPT1A mRNA 表達(dá)變化，評(píng)價(jià)白毫銀針?biāo)崛∥飳?duì)非酒精性脂肪肝氧化應(yīng)激的干預(yù)作用，以期闡明其防治非酒精性脂肪肝的作用機(jī)制。
(文章學(xué)術(shù)性較強(qiáng)，可以文章內(nèi)紅字作為重點(diǎn)閱讀)
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過(guò)度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關(guān)的獲得性代謝應(yīng)激性肝損傷。隨著肥胖及其相關(guān)代謝綜合征全球化的流行趨勢(shì)，非酒精性脂肪性肝病現(xiàn)已成為歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家和我國(guó)富裕地區(qū)慢性肝病的重要病因，普通成人NAFLD患病率10%～30%，其中10%～20%為NASH，后者10年內(nèi)肝硬化發(fā)生率高達(dá)25%。——科普中國(guó)
目前，NAFLD的發(fā)病機(jī)制被廣為接受的是“二次打擊”學(xué)說(shuō)。該學(xué)說(shuō)認(rèn)為“第一次打擊”是由胰島素抵抗、肥胖等因素引起的。而啟動(dòng)“第二次打擊”的因子主要包括氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過(guò)氧化、促炎癥因子、線粒體功能障礙等。
“第二次打擊”理論認(rèn)為，在脂肪變性的基礎(chǔ)上，以反應(yīng)氧體系為核心的氧應(yīng)激、脂質(zhì)過(guò)氧化及炎性細(xì)胞因子的作用可導(dǎo)致脂肪變性肝細(xì)胞發(fā)生炎癥、壞死和纖維化，使肝臟進(jìn)一步損害，而抗氧化劑能減小肝臟損傷程度。
據(jù)研究，白茶抗氧化能力在六大茶類中居于前列。因白茶加工工藝只有萎調(diào)和干燥，未經(jīng)過(guò)劇烈的機(jī)械損傷和熱的破壞，自由基含量最低。
重要的是白茶生產(chǎn)過(guò)程中，茶多酚雖然氧化，但其緩慢氧化形成的黃酮物質(zhì)明顯增加，白茶黃酮含量7.32～12.82 mg·g-1，黃酮含量比鮮葉升高 16.2 倍。白茶氨基酸含量是其他五大茶類的1.13～1.25 倍，咖啡堿含量高14%～29%，而茶多酚、黃酮類物質(zhì)、氨基酸、咖啡堿對(duì)茶浸提液抗氧化能力有重要影響。
試驗(yàn)證明，白毫銀針?biāo)崛∥锬軠p輕非酒精性脂肪肝模型組肝細(xì)胞TG蓄積、降低細(xì)胞內(nèi)MDA含量、升高SOD活性，其機(jī)制可能與抑制 SREBP-1c 及其下游的FAS基因表達(dá)，減少TG合成，且增強(qiáng)CPT1A 基因表達(dá)，加速 TG 分解有關(guān)。
各組細(xì)胞內(nèi) SOD、MDA、TG 含量的變化
A.正常組;B.自然恢復(fù)組;C.模型組;D.辛伐他汀組;E.油酸處理 24 h，1 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h;F.油酸處理 24 h，0.5 mg·mL-1白毫銀針茶湯處理 24 h;G. 1 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h，油酸處理 24 h;H. 0.5 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h，油酸處理 24 h。
由圖可知，模型組(非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型)與正常組相比，模型組細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶SOD含量顯著降低;茶湯處理組(E、F、G 與H)和辛伐他汀(降血脂藥物)處理組(D)SOD含量顯著高于模型組;茶湯處理組、辛伐他汀組與自然恢復(fù)組比較，D、E組SOD含量均顯著高于自然恢復(fù)組。
從丙二醛MDA含量來(lái)看，模型組細(xì)胞(非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型)是正常組的3倍多;茶湯處理組、辛伐他汀(降血脂藥物)處理組的 MDA 含量均顯著低于模型組;茶湯處理組 E、F、G 和辛伐他汀組 MDA 含量也顯著低于自然恢復(fù)組。
模型組細(xì)胞(非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型)甘油三脂TG含量是正常組的5倍多;模型組與茶湯處理組、辛伐他汀(降血脂藥物)處理組相比，D、E、F、G 組 TG 含量均顯著低于模型組;茶湯處理組 E、G 和辛伐他汀組的TG含量均顯著低于自然恢復(fù)組。
02
各組細(xì)胞油紅 O 染色
A. 0.5 mg·mL-1 白毫銀針處理 24 h，油酸處理 24 h;B. 1 mg·mL-1 白毫銀針處理 24 h，油酸處理 24 h;C.油酸處理 24 h，0.5mg·mL-1 白毫銀針處理 24 h;D.油酸處理 24 h，1 mg·mL-1 白毫銀針處理 24 h;E.辛伐他汀組;F.自然恢復(fù)組;G.模型組;H.正常組。
利用倒置顯微鏡觀察油紅染色后的細(xì)胞，結(jié)果如圖。模型組(G)與其余各處理組相比，細(xì)胞內(nèi)橘紅色脂滴數(shù)量最多，部分出現(xiàn)片狀融合現(xiàn)象;D 組細(xì)胞橘紅色脂滴數(shù)量最少。由模型組G 與自然恢復(fù)組 F 相比可知，脂肪肝細(xì)胞具有自我修復(fù)能力，脂滴數(shù)量在一定程度上減少，且脂滴顏色褪去。
03
各組細(xì)胞內(nèi) SREBP-1c、FAS 和 CPT1A mRNA 表達(dá)變化
A.正常組;B.自然恢復(fù);C.模型組;D.辛伐他汀組;E.油酸處理 24 h，1 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h;F.油酸處理 24 h，0.5 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h;G. 1 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h，油酸處理 24 h;H. 0.5 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h，油酸處理 24 h。
正常組與模型組相比，模型組 (非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型)SREBP-1c 表達(dá)顯著上調(diào);茶湯處理組(E、F、G 與 H)、辛伐他汀處理組(D)的SREBP-1c 表達(dá)顯著下調(diào);辛伐他汀處理組(D)和 E、F、G茶湯處理組 SREBP-1c 表達(dá)量均顯著低于自然恢復(fù)組(B)。此外，E茶湯處理組 SREBP-1c 表達(dá)量顯著低于辛伐他汀(降血脂藥物)處理組(D)。
FAS 表達(dá)模式與 SREBP-1c 相似，不同之處在于辛伐他汀處理組(D)和茶湯處理組(E、F、G 與 H)FAS表達(dá)量均顯著低于自然恢復(fù)組(B);E、G 與 H 茶湯處理組 FAS 表達(dá)量均顯著低于辛伐他汀處理組(D)。
CPT1A 表達(dá)模式與以上兩個(gè)基因基本相反。茶湯處理組(E、F、G、H)和辛伐他汀處理組的 CPT1A 表達(dá)均顯著高于模型組;辛伐他汀處理組和 E、G 茶湯處理組 CPT1A 表達(dá)顯著高于自然恢復(fù)組。
討論
氧化應(yīng)激與非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生密切相關(guān)。氧化應(yīng)激會(huì)引起不同程度的肝損傷。
由自由基攻擊細(xì)胞膜磷脂分子引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)而產(chǎn)生的 MDA 具有一定的細(xì)胞毒性。
同時(shí)，肝細(xì)胞 MDA 含量常被作為評(píng)判細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)，如肝細(xì)胞 MDA 含量上升，則表明發(fā)生了一定程度的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，且有可能進(jìn)一步引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)。
細(xì)胞在油酸的刺激下產(chǎn)生大量的 MDA 等有害物質(zhì)破壞其完整性，而 SOD 作為氧自由基的清除劑，其活性增強(qiáng)可減弱細(xì)胞損傷，從而起到保護(hù)細(xì)胞的作用。
本研究中，模型組與正常組比較，細(xì)胞內(nèi) MDA顯著升高，而細(xì)胞內(nèi) SOD 活力顯著降低;茶湯處理組(E、F、G與H)和辛伐他汀處理組(D)SOD 含量顯著高于模型組，而MDA含量顯著低于模型組，其中E組SOD活性較高，而 MDA 含量最低，且根據(jù)油紅染色圖可知，E組脂滴數(shù)量少?？芍?1 mg·mL-1 白毫銀針?biāo)崛∥锟娠@著改善肝臟脂質(zhì)積累。
在油酸的刺激下，細(xì)胞脂肪酸的攝取和合成量超過(guò)其分解代謝速度，脂質(zhì)被儲(chǔ)存在肝細(xì)胞中，并可能導(dǎo)致肝細(xì)胞積累大量甘油三酯(TG)。積累 TG 的肝細(xì)胞內(nèi)氧自由基增多，當(dāng)積累量超過(guò)肝臟氧化能力時(shí)，則加劇脂質(zhì)積累和細(xì)胞代謝紊亂，進(jìn)而造成細(xì)胞損傷。
在NAFLD患者中，肝臟SREBP-1c表達(dá)升高。SREBP-1c 是控制肝臟脂質(zhì)合成的重要轉(zhuǎn)錄因子，促使肝臟脂肪酸合成增加而消耗減少，導(dǎo)致肝臟內(nèi)脂質(zhì)累積。SREBP-1c 可促進(jìn)下游 FAS 等生脂基因的表達(dá)，增強(qiáng)脂肪酸合成，加速 TG 積累，在肝臟 TG 合成中發(fā)揮重要作用。CPT1A 是將脂肪酸從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體基質(zhì)的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，參與線粒體 β 氧化，加速脂肪酸分解。
本研究中，1 mg·mL-1 白毫銀針?biāo)崛∥锬茱@著改善肝臟脂質(zhì)積累，且作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制脂質(zhì)合成有關(guān)基因 SREBP-1c 和 FAS 的表達(dá)，抑制 TG 合成;上調(diào)脂肪酸 β 氧化基因 CPT1A，加速 TG 分解，從而緩解脂肪肝細(xì)胞模型中 TG 堆積。
參考文獻(xiàn)：林秋香,等：白毫銀針茶水提取物對(duì) LO2 細(xì)胞脂質(zhì)積累的影響及其機(jī)理研究
來(lái)源：華茶號(hào)
如涉及侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除
暫無(wú)評(píng)論